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    Western Blot實驗技術服務
    發布時間:2018/8/1 14:18:43 閱讀次數:1982

     一、概述

         Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應,先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體上,然后再加上抗體形成抗原抗體復合物,再利用發光或顯色的原理將結果顯示到膜或者底片上。

         SDS-PAGE電泳的高分辨率以及固相免疫測定的特異性和敏感性保證了最終實驗結果的準確性。WB是半定量實驗,相比較于定性實驗有數據分析,但是需要嚴格的參照標準,因此不是準確的數量關系,這也是與定量試驗的不同之處。

    二、技術流程

    1.根據目標蛋白在細胞中的位置(細胞核中,細胞漿中,細胞膜上)和目標蛋白的性質(變性以及非變性)選擇合適的提取蛋白的方法

    2.用合適的方法例如Bradford或者BCA法測定蛋白含量

    3.根據目標蛋白的大小制作合適濃度的SDS凝膠

    4.根據目標蛋白的大小選擇合適的電泳電壓以及電泳時間

    5.根據目標蛋白的大小以及剪切的凝膠的大小選擇合適的轉膜電流以及轉膜時間

    6.根據目標蛋白的性質選擇合適的封閉方法,例如脫脂奶粉,BSA等方法封閉

    7.選擇合適濃度的一抗進行孵育,洗膜

    8.選擇合適濃度的二抗進行孵育,洗膜

    9.ECL發光液進行曝光

    三、客戶須知

    1、 檢測樣本:新鮮的組織或者細胞

    2、 樣本量:檢測細胞樣本的一個指標的最低細胞含量是1*106,檢測組織樣本的一個指標的最低組織樣品為30mg(建議多提供樣本,便于研磨)

    3、樣本保存:

    (1)新鮮的組織樣本:迅速凍存。

    (2)懸浮細胞:收集完以后,冷的PBS洗3遍,吸凈殘余的液體,冷凍保存。

    (3)貼壁細胞:吸凈培養基以后,預熱的PBS洗3遍,胰酶收集,再用冷的PBS洗3遍,吸凈殘余液體,冷凍保存;對于不適合用胰酶收集的細胞(例如胰酶處理會消化掉一部分蛋白或者對于目標蛋白有刺激作用),預熱的PBS洗3遍以后,用細胞刮收集細胞,吸凈殘余的液體,冷凍保存。

     4、請提前告訴我們:您樣本的種屬(人、大鼠、小鼠、兔、豬等)、樣本數量、待測指標。

    5、樣本郵寄:放入冰袋或者干冰及時寄送,建議選擇順豐快遞陸運或者中通快遞陸運。

    四、報告內容及標準

    1  目的蛋白曝光照片一張

    2  電子版目的蛋白和內參的照片

    3  灰度分析數據一份

    4  蛋白含量數據

    5  完整的實驗報告(試驗方法,試驗參數,實驗儀器參數)

    五、收費標準及服務周期

        收費標準及服務周期因根據客戶提供的樣品不同而有所改變,詳細請跟客服專員聯系或參考所簽署的合作合同。

    六、質量保證

        良好的實驗平臺體系,先進的儀器設備以及從事WB實驗多年的優質服務團隊為您最終滿意的實驗結果保駕護航。

    七、售后服務

        本公司會不定期進行顧客回訪,以提高我們的服務質量。本條款以所簽訂的合作合同為依據,詳情會因合同內容的不同而有所差異。

    營業執照

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