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    免疫血清簡單介紹
    發布時間:2018/11/14 11:18:17 閱讀次數:2184

     免疫血清也稱抗血清,就是含有抗體的血清制劑。種類很多,廣泛的應用于醫學、生物學的各個學科,特別在免疫測定和免疫病理的診斷中更是常用。

    免疫血清的實驗原理:

    具有免疫原性的抗原可刺激機體相應B細胞增殖、分化形成漿細胞并分泌特異性抗體。由于抗原分子表面的不同決定簇為不同特異性的B細胞克隆所識別,因此由某一抗原刺激機體后產生的抗體,實際上為針對該抗原分子表面不同決定簇的抗體混合物(即多克隆抗體)。另外,抗體的產生具有回憶應答的規律性,現為初次免疫注射與再次免疫注射后的抗體應答特點截然不同。這是由于記憶性B細胞參與再次應答所致。

    免疫方法 

    不同的免疫血清根據抗原的性質不同而不同。

    下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說明。
    1.
    用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛,以酒精及碘酒消毒皮膚。
    2.
    第一次免疫

    2 ml注射器吸取弗氏完全佐劑(FCA)乳化的抗原(人IgG)下稱FCA IgG1 ml,每側腳掌皮下各注入0.5 ml。

    3. 第二次免疫
    間隔10-14 天后,于兩側窩及鼠蹊部腫大的淋巴結內注入FCA-IgG,每個淋巴結注0.1 ml,其余注入淋巴結附近皮下共1 ml。如淋巴結未腫大或腫大不明顯時,直接注入兩側窩及鼠蹊部皮下。

    4. 間隔7-10 天后,從耳靜脈采血0.51.0 ml,分離血清,以雙相瓊脂擴散試驗測定免疫血清的抗體效價(即試血)。效價至少應達到116以上時才能放血。

    5. 若效價未達到要求,可用不加佐劑的抗原液(人IgG)耳靜脈內注射免疫。即于1 周內注射3 次,分別為0.1、0.3、0.5 ml。間隔1 周再試血。如效價達到要求應立即放血。另外,也可在第2 次免疫后,以弗氏不完全佐劑(FIA)乳化的抗原(人IgG)(簡稱FIA-IgG)再免疫1-2 次。注射部位、劑量和間隔均同第2 次,再試血測抗體效價,如效價達到要求立即放血。

    6. 放血分為心臟采用血法和頸動脈放血法,兩種選其一即可。

    7. 分離血清:將三角燒瓶的血置37 ℃溫箱1 小時,再置4 ℃冰箱內34 小時。待血液凝固血塊收縮后,用毛細滴管吸取血清。于3000 rpm離心15 分鐘,取上清加入防腐劑(0.01 %硫柳汞或0.02 %疊氮鈉,最終濃度),分裝后置4 ℃冰箱中保存備用。

    實驗的注意事項:

    1.       免疫用實驗動物不能使用妊娠動物。同時實驗動物的抗體反應性個體差異性較大,因此免疫時至少應選用兩只以上動物。

    2.       免疫用的抗原必須經FCAFIA充分乳化后才能注射,否則將明顯影響抗原的免疫效果。

    小鼠免疫需要的抗原量小,每次放血量不可以超過0.5ml。免疫血清屬于多克隆抗體,一般如果是用于FACS分析,多數ELISA或細胞毒實驗時,不需要純化。但是,對于需要知道精確抗體濃度時,來進行化學修飾標記熒光素或放射物時或制備抗體片斷時,要純化。

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